كيف يتم استخراج بروتين جدار الخلية؟
البروتينات هي اللبنات الأساسية للخلايا وهي الجزيئات الحيوية الأكثر وفرة وتنوعًا، حيث أن البروتينات مسؤولة حرفياً عن جميع الجوانب الوظيفية للخلية تقريبًا من صنع الغشاء الخلوي إلى تحفيز التفاعل البيولوجي، ووفقًا لقاعدة البيانات يحتوي ما يقرب من 20-30 ٪ من إجمالي البروتينات المشفرة على بروتينات غشائية متكاملة بينما يشتمل جزء 10-20 ٪ على بروتينات مرتبطة بالغشاء.
تشمل هذه المجموعة المتنوعة من البروتينات محولات الإشارة والناقلات والقنوات الغشائية ومستقبلات سطح الخلية، حيث أصبحت هذه المجموعة المتخصصة من البروتينات هدفًا لتطوير الأدوية العلاجية في العقود القليلة الماضية ومع ذلك، نظرًا لعدم توفر التفاصيل الهيكلية الكاملة لهذه البروتينات يكون الاستهداف صعبًا بعض الشيء، مما يجعل تصميم الأدوية أكثر تعقيدًا من المتوقع، والنهج الصحيح هو تصميم طرق مصقولة يمكن أن تساعد في استخراج بروتينات الغشاء وتحليلها.
تنقية البروتينات الغشائية ليست إجراءً أوليًا مثل عملية استخراج البروتين الخلوي، حيث أن الخطوة الأولى دقيقة للغاية وغامضة وتتطلب تعطيل طبقة الفسفوليبيد الثنائية دون الإضرار ببنية البروتين، والعامل الأكثر شيوعًا المستخدم لتلبية هذه التوقعات هو الجزيئات البرمائية مثل المنظفات التي يمكنها بسهولة تكرار الهيكلية.
استبدال جزيئات الفسفوليبيد الطبيعية، منذ أن تم تطوير طرق الاستخراج تم استخدام عدة فئات من المنظفات لتحسين طريقة الاستخراج الأكثر كفاءة لذلك، يصبح فحص المنظفات خطوة أساسية لتطوير بروتوكولات استخراج البروتين الغشائي ومع ذلك بصرف النظر عن بعض المواد الخافضة للتوتر السطحي أو المنظفات لا توجد إرشادات محددة يمكن أن تشير إلى المنظف الأكثر ملاءمة لفئة من بروتينات الغشاء، حيث يجب تحسين البروتوكول وفقًا للحاجة التجريبية.
تقدم (Creative Proteomics) خدمات عزل جدار الخلية وتنقية بروتين جدار الخلية للخلايا النباتية والفطريات والبكتيريا، إذ يمكن أن تساعد هذه الخدمة في الحصول على جدار الخلية المنقى وبروتينات جدار الخلية لإجراء فحوصات لاحقة، حيث أن جدار الخلية عبارة عن هيكل خاص موجود حول الخلايا النباتية، وعدد قليل من الكائنات الحية الأخرى، بما في ذلك الفطريات والبكتيريا وما إلى ذلك.
المكون الرئيسي لجدران الخلايا النباتية هو الكربوهيدرات الهيكلية، السليلوز، بينما تتكون جدران الخلايا الأخرى بشكل أساسي من البروتينات والكيتين والسكريات وما إلى ذلك، كما تحمي جدران الخلايا وتحافظ على شكل الخلايا، بالنسبة للخلايا النباتية يمكن أن تشكل جدران الخلايا جسورًا هيوليًا للسماح بالتداول الحر للسوائل بين الخلايا المجاورة، وفي البكتيريا تعمل جدران الخلايا كسوط وشعيرة، مما يساعد في الحركة وتبادل المواد الجينية على التوالي.
علاوة على ذلك تلعب بروتينات جدار الخلية دورًا مهمًا في الالتصاق والإمراض والاستضداد والتشكل وما إلى ذلك، ومن ثم فإن عزل جدار الخلية وبروتين جدار الخلية هو الخطوة الأولى والضرورية للتحقيق بشكل أفضل في المكونات المختلفة لجدران الخلية والوظائف والتفاعلات بين الخلايا الخلوية والتفاعلات بين جدار الخلية والمصفوفة خارج الخلية إلخ.
مزايا خدمات عزل جدار الخلية وتنقية بروتين جدار الخلية:
في تجربة غنية في فصل وتنقية جدار الخلية، يتم الحصول على جدار خلوي نقي مع شوائب منخفضة دون فقد مكونات جدار الخلية، إذ يمكن عزل جدار الخلية وتنقيته من الخلايا النباتية والفطريات والبكتيريا، كما يمكن استخلاص البروتين من جدار الخلية دون تلوث البروتينات داخل الخلايا والأيضات أثناء العزل، يمكن أن نجري اختبارات التحقق من النقاء للتأكد من وصول البروتين المعزول إلى النقاء المستهدف وإلا فلن تكون هناك أية رسوم.