كيفية تحليل الحمض النووي لدورة الخلية؟
غالبًا ما يتم إجراء تحليل دورة الحمض النووي الخلية، ولكن ليس بالضرورة دائمًا باستخدام الرسوم البيانية ذات المعلمة الواحدة لشدة التألق لوصمة الحمض النووي مثل يوديد البروبيديوم، وعلى الرغم من أنه يمكن تحليل هذه الرسوم البيانية ذات المعلمة الواحدة باستخدام المناطق الموضحة، فمن المفضل عمومًا استخدام برامج أكثر تخصصًا لديها القدرة على تحديد كل مكون من مكونات دورة الخلية بدقة أكبر.
مكونات دورة الخلية الرئيسية التي يمكن اكتشافها عن طريق قياس التدفق الخلوي هي خلايا (G0 / G1) ثنائية الصبغة وخلايا المرحلة S وخلايا (G2 / M) رباعية الصبغيات، حيث نظرًا لأن الخلايا الرباعية الصبغية تحتوي على ضعف كمية الحمض النووي والخلايا ثنائية الصبغيات، وأن كثافة التألق لبقع الحمض النووي مثل بروبيديوم يوديد أو 7-أمينو أكتينوميسين- D تتناسب مع كمية الحمض النووي يتم جمع هذه الدراسات على مقياس خطي.
تتمثل الوظيفة الرئيسية للتحليل في حل مجموعات (G0 / G1) وS و(G2 / M) لسوء الحظ هذه ليست مجموعات سرية ولا تنتج المناطق البسيطة سوى تقريب تقريبي للغاية للنسبة المئوية الفعلية للخلايا في كل مرحلة وهكذا، تطورت برامج خاصة قادرة على تفكيك مراحل دورة الخلية هذه من بعضها البعض.
تستخدم هذه الأساليب إما بارامترية أو غير معلمية لاشتقاق ملاءمة أكثر دقة لقمم السكان في مراحل دورة الخلية، وغالبًا مع افتراض أن الانتشار الغاوسي مسؤول عن توسيع قمم دورة الخلية، مما يمكن توقعه نظريًا يمكن أن تزداد هذه العملية تعقيدًا بسبب وجود حطام ربما نوى مجزأة أو ميتوكوندريا أو جزيئات صغيرة أخرى تحتوي على الحمض النووي، والتي تعطي بعض التلطيخ يتطفل على مقصورات دورة الخلية، كما تمتلك معظم برامج تحليل دورة الخلية لقياس التدفق الخلوي القدرة على نمذجة هذا الحطام وطرحه من إحصائيات دورة الخلايا.
هناك عامل محير آخر في تحليل دورة خلية الحمض النووي، وهو وجود مضاعفات أو تكتلات الخلية داخل المجموعات السكانية التي تتم دراستها، حيث نظرًا لأنه من المعروف أن الخلايا في الطور (G2 / M) تحتوي على ضعف كمية الحمض النووي مثل الخلايا في طور (G0 / G1) فمن المنطقي أن خليتين في طور (G0 / G1) متجمعتين معًا يمكنهما تقليد الخلايا في (G2 / M).
لا يمكن حل هاتين الحالتين إلا من بعضهما البعض إذا كان مدروس يعطي وقت الحصول على البيانات لهذه المشكلة المحتملة، ويمكن استخدام عرض النبضة مع ارتفاع النبضة ومساحتها لمعالجة هذه المشكلة، في حين أن مضاعفات خليتين (G0 / G1) سيكون لها نفس ارتفاع النبضة لخلية (G2 / M) واحدة، فإن عرض النبضة لهذين القياسين سيكون مختلفًا، والمجاميع لها عرض نبض أكبر من الفردي لذلك من خلال جمع معلمة عرض النبضة أثناء الاستحواذ، يمكن فصل الثنائيات أثناء التحليل اللاحق ويمكن اشتقاق تحديدات أكثر دقة للنسبة المئوية للخلايا في الطور (G2 / M).